Стратегии выявления антител для ранней диагностики ВИЧ-инфекции

Современные методы диагностики ВИЧ-инфекции

Своевременная диагностика ВИЧ-инфекции становится крайне важной мерой, т. к. ранее начало лечения может во многом предопределить дальнейшее развитие заболевания и продлить жизнь больного СПИДом.

В последние годы наблюдается весомый прогресс в области выявления этой страшной болезни: на смену старым тест-системам приходят более совершенные, методы обследования становятся более доступными, и их точность значительно повышается.

В данной статье расскажем о современных методах диагностики ВИЧ-инфекции, знать которые полезно для своевременного лечения данной проблемы и поддержания нормального качества жизни заболевшего.

Методики диагностики ВИЧ

В России для диагностики ВИЧ-инфекции проводится стандартная процедура, включающая в себя два уровня:

• ИФА тест- система (скрининговый анализ);
• иммунный блоттинг (ИБ).

Также для диагностики могут применяться другие методики:

Ифа тест-системы

На первом этапе диагностики для выявления ВИЧ-инфекции применяется скрининговый тест (ИФА), который основан на созданных в лабораториях белках ВИЧ, улавливающих вырабатывающиеся в организме в ответ на инфицирование специфические антитела. После их взаимодействия с реагентами (ферментами) тест-системы изменяется окраска индикатора. Далее эти изменения цвета обрабатываются на специальной аппаратуре, которая и определяет результат выполненного анализа.

Такие ИФА-тесты способны показывать результат уже через несколько недель после внедрения ВИЧ-инфекции. Этот анализ определяет не наличие вируса, а выявляет выработку антител к нему. Иногда, в организме человека выработка антител к ВИЧ начинается через 2 недели поле заражения, но у большинства людей они вырабатываются на более поздних сроках, спустя 3-6 недель.

Существует четыре поколения ИФА-тестов с различной чувствительностью. В последние годы чаще применяются тест-системы III и IV поколения, которые созданы на основе синтетических пептидов или рекомбинантных белков и обладают большей специфичностью и точностью.

Точность ИФА-тест-систем III и IV поколения составляет 93-99% (более чувствительны тесты, которые выпускаются в странах западной Европы – 99%).

Для выполнения ИФА-теста проводится забор 5 мл крови из вены пациента. Между последним приемом пищи и анализом должно пройти не менее 8 часов (как правило, он выполняется утром натощак). Такой тест рекомендуется сдавать не ранее, чем через 3 недели после предполагаемого заражения (например, после незащищенного полового акта с новым половым партнером).

Результаты ИФА-теста получаются через 2-10 дней:

• отрицательный результат: указывает на отсутствие инфицирования ВИЧ и не требует обращения к специалисту;
• ложноотрицательный результат: может наблюдаться на ранних сроках инфицирования (до 3 недель), при поздних стадиях СПИДа при выраженном подавлении иммунитета и при неправильно проведенной подготовке крови;
• ложноположительный результат: может наблюдаться при некоторых заболеваниях и при неправильно проведенной подготовке крови;
• положительный результат: указывает на заражение ВИЧ инфекцией, требует проведения ИБ и обращения пациента к специалисту в центр СПИДа.

Почему ИФА-тест может давать ложноположительные результаты?

Ложноположительные результаты ИФА-теста на ВИЧ могут наблюдаться при неправильной обработке крови или у больных с такими состояниями и заболеваниями:

• множественная миелома;
• алкогольный гепатит;
• инфекционные заболевания, спровоцированные вирусом Эпштейна-Барр;
• состояние после диализа;
• аутоиммунные заболевания;
• на фоне беременности;
• состояние после вакцинации.

При вышеописанных причинах в крови могут присутствовать неспецифические перекрестно реагирующие антитела, выработка которых была спровоцирована не ВИЧ-инфекцией.

В последние годы частота ложноположительных результатов существенно снизилась благодаря применению тест-систем III и IV поколения, которые содержат более чувствительные пептидные и рекомбинантные белки (они синтезируются при помощи генной инженерии in vitro). После начала применения таких ИФА-тестов частота ложноположительных результатов значительно снизилась и составляет около 0,02-0,5%.

Выявление ложноположительного результата не означает, что человек инфицирован ВИЧ. В таких случаях ВОЗ рекомендует провести еще один ИФА-тест (обязательно IV поколения).

Кровь пациента отправляется в референс или арбитражную лабораторию с пометкой «повторить» и исследуется на ИФА тест-системе IV поколения.

Если результат нового анализа отрицательный, то первый результат признается ошибочным (ложноположительным) и ИБ не проводится.

При положительном или сомнительном результате во время второго теста больному обязательно назначается проведение ИБ через 4-6 недель для подтверждения или опровержения ВИЧ-инфицирования.

Иммунный блоттинг

Окончательный диагноз инфицирования ВИЧ может устанавливаться только после получения положительного результата иммунного блоттинга (ИБ). Для его проведения применяется нитроцеллюлозная полоска, на которую нанесены вирусные белки.

Забор крови для ИБ выполняется из вены. Далее она подвергается специальной обработке и содержащиеся в ее сыворотке белки разделяют в специальном геле по их заряду и молекулярной массе (манипуляция проводится на специальной аппаратуре под воздействием электрического поля).

На гель из сыворотки крови накладывают нитроцеллюлозную полоску и проводят блоттинг («промакивание») в специальной камере. Полоска обрабатывается и если в используемых материалах есть антитела к ВИЧ, то они связываются с антигенными полосами на ИБ и проявляются в виде линий.

ИБ считается положительным если:

• по критериям American CDC – на полоске есть две или три линии gp41, p24, gp120/gp160;
• по критериям American FDA – на полоске есть две линии р24, р31 и линия gр41 или gр120/gр160.

В 99,9% случаев положительный результат ИБ указывает на ВИЧ-инфицирование.

При отсутствии линий – ИБ является отрицательным.

При выявлении линий с gр160, gр120 и gр41- ИБ является сомнительным. Такой результат может выявляться при:

В таких случаях рекомендуется выполнение повторного исследования при помощи набора другой фирмы. Если же после дополнительного ИБ результат остается сомнительным, то необходимо наблюдение в течение полугода (через каждые 3 месяца проводятся ИБ).

Полимеразная цепная реакция

Тест на ПЦР может определять РНК вируса. Его чувствительность достаточно высока и он позволяет выявлять ВИЧ-инфицирование уже через 10 дней после заражения. В некоторых случаях ПЦР может давать ложноположительные результаты, т. к. его высокая чувствительность может реагировать и на антитела к другим инфекциям.

Данная методика диагностики является дорогостоящей, требует специального оборудования и высокой квалификации специалистов. Эти причины не дают возможности проводить ее при массовом тестировании населения.

ПЦР применяется в таких случаях:

• для выявления ВИЧ у новорожденных, которые родились от ВИЧ-инфицированных матерей;
• для выявления ВИЧ в «периоде окна» или при сомнительном ИБ;
• для контроля концентрации ВИЧ в крови;
• для исследования донорской крови.

Только по тесту ПЦР диагноз ВИЧ не ставится, а проводится в качестве дополнительного метода диагностики для разрешения спорных ситуаций.

Экспресс-методы

Одной из инноваций в диагностике ВИЧ стали экспресс-тесты, результаты которых могут оцениваться уже через 10-15 минут. Наиболее эффективные и точные результаты получаются при помощи иммунохроматографических тестах, основанных на принципе капиллярного потока.

Они представляют собой специальные полоски, на которые наносится кровь или другие исследуемые жидкости (слюна, моча). При наличии антител к ВИЧ спустя 10-15 минут на тесте появляются цветная и контрольная полоска – положительный результат.

При отрицательном результате – появляется только контрольная полоска.

Как и после тестов ИФА, результаты экспресс-тестов должны подтверждаться анализом ИБ. Только после этого может ставиться диагноз о ВИЧ-инфицировании.

Остальные тесты для домашнего использования еще не были одобрены FDA и их результат может быть очень сомнительным.

Несмотря на то, что экспресс-тесты по своей точности уступают ИФА-тестам IV поколения, они широко применяются для дополнительного тестирования населения.

Сдать анализы на выявление ВИЧ-инфекции можно в любой поликлинике, ЦРБ или в специализированных СПИД-центрах. На территории России они проводятся абсолютно конфиденциально, или анонимно.

Каждый пациент может рассчитывать на получение медицинской или психологической консультации до или после проведения анализа.

Платить за тесты на ВИЧ придется только в коммерческих лечебных учреждениях, а в государственных поликлиниках и больницах они выполняются бесплатно.

О том, какими путями можно заразиться ВИЧ-инфекцией и какие мифы существуют о возможностях заразиться, читайте в этой статье.

К какому врачу обратиться

Чтобы обследоваться на ВИЧ-инфекцию, нужно посетить терапевта и взять у него направление на анализ. Кроме того, можно прийти непосредственно в Центр профилактики и борьбы со СПИДом и сдать анализы там анонимно. Направляет на это обследование и врач-инфекционист или венеролог при подозрении на ВИЧ-инфекцию.

: ( — 1, 5,00 из 5) Загрузка…

Источник: https://myfamilydoctor.ru/sovremennye-metody-diagnostiki-vich-infekcii/

Диагностика и тестирование вич инфекции

Диагностика ВИЧ-инфекции проводится для постановки окончательного диагноза. Если пациент уверен в инфицировании, не следует заниматься самолечением: необходимо обратиться к специалисту.

Под маской СПИДа могут скрываться многие заболевания, которые излечиваются при обращении к врачу. Тесты на инфекцию являются наиболее распространенным и ранним методом диагностики.

Определение степени инфицирования продолжается в лаборатории при сдаче анализа крови методом ИФА или ПЦР.

Основные направления в диагностике иммунодефицита человека

В связи с ухудшением эпидемиологических показателей по ВИЧ-инфекции, большое значение приобрело раннее распознавание недуга. Врач проводит дифференциальную диагностику ВИЧ-инфекции, собирает эпидемиологические сведения о болезни.

В процессе изучения способов заражения специалист проводит такие исследования, как:

• изучение механизма развития ВИЧ-инфекции;
• диагностику сопутствующих недугов.

Методы диагностики ВИЧ-инфекции направлены на выявление антител в ИФА, а при подтверждении диагноза специалист проводит разъяснительную работу с больным о соблюдении им правил во избежание распространения недуга.

Тестирование на СПИД назначается детям, рожденным от инфицированных матерей, после проведенного антиретровирусного лечения. Скрининговые анализы определяют антитела к ВИЧ 1 и 2.

Ранняя диагностика иммунодефицита позволяет больному в короткие сроки изменить образ жизни, начать лечение и получить психологическую помощь. Характерные жалобы пациента всегда помогают врачу заподозрить СПИД и направить кровь пациента на исследование в лабораторию.

Экспресс-тесты 4 поколения на СПИД

Лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции, проводимая с тестами 4 поколения, позволяет определить недуг в острой фазе болезни. Тест Determine HIV-1/2 Ag/Ab Combo высокочувствителен к антигенам и антителам в сыворотке крови больного. Специфичность исследования составляет 99,19% — по Ab-линии, и 99,64% — по Ag-линии, а положительное прогностическое значение определяется в пределах 55%.

Чувствительность анализа выявляется путем определения ранее известных результатов. При получении положительных данных вероятность ошибочных цифр достигает 45%.

В домашних условиях проводится тест по мазку из полости рта. Исследование комфортное, простое и безболезненное для пациента.

Тест-полоска «ИммуноХром- ½ -Экспресс» применяется для проведения анализа,и обеспечивает стабильный результат, если больной соблюдает инструкцию, прилагаемую к препарату.

При обнаружении двух одинаковых фиолетовых полосок, расположенных в тестовой зоне и области контроля, тест считается положительным. Наличие одной полоски расшифровывается как отрицательный результат анализа.

Время, затраченное на исследование, составляет от 15 до 30 мин.

Поражение иммунной системы происходит при внедрении вируса в организм пациента. Срок инкубационного периода колеблется в пределах 3 месяцев.

После нежелательного и опасного контакта с партнером необходимо сдать анализ на ПЦР и на основании полученных результатов сделать вывод о наличии ВИЧ-инфекции в организме. Максимальный период для начала диагностики иммунодефицита составляет 8-9 месяцев, а в исключительных случаях он продлевается до 2 лет.

Для лабораторной диагностики раннего периода болезни используют метод полимеразной реакции, определяющий нуклеиновые кислоты. Результаты анализа расшифровывают в течение нескольких часов, при соблюдении полной анонимности.

Тест на ВИЧ/СПИД креатив МП-ВИЧ ½ проводится в домашних условиях, через 4 недели после опасного контакта. Тест-кассеты определяют антитела к вирусу ВИЧ № 1 и 2.

Методы экспресс-диагностики у детей на СПИД

Младенцы, рожденные от инфицированных матерей, подвергаются процедуре выявления вируса СПИДа. Серологические методы установления недуга не всегда подтверждаются у малышей в возрасте 5- 18 месяцев, но результат имеет последующее положительное значение в иммуноблоте.

Высокочувствительный метод ПЦР позволяет определить наличие в организме ребенка вируса СПИДа.

ДНК возбудителя обнаруживают у ребенка на первом месяце жизни. Система определения провируса иммунодефицита предназначена для установления концентрации РНК возбудителя.

Для анализа пригодна цельная кровь или ее высохшие пятна. Образец помещают в пробирку с консервантом ЭДТА в пропорции 1:20. Хранят материал при температуре 2-8 °C двое суток, исключив замораживание крови.

Образцы сухой крови получают методом нанесения цельной жидкости на специальную бумагу. Материал для диагностики хранят при температуре не более 8 °C. Срок использования карточек не превышает 8 месяцев.

Осмотр новорожденного и взятие анализа проводят в следующие сроки: через 2 суток после рождения, в двухмесячном возрасте, через 3-6 месяцев. Обнаружение гена провируса ВИЧ через несколько часов после рождения указывает на инфицирование плода во внутриутробный период. Инфицирование может произойти во время родов или при грудном вскармливании малыша.

Диспансерное наблюдение отменяют после получения отрицательных тестов методом ПЦР спустя 4 месяца после рождения ребенка.

Ошибки при проведении исследования

Ложноположительный анализ на присутствие вируса иммунодефицита в крови пациента по многим причинам искажает точность определения недуга. Ошибки подстерегают больного при проведении теста в домашних условиях.

Ложный результат появляется при наличии у пациента таких состояний, как перекрестная реакция, беременность, у доноров крови, при инфицировании вирусом гриппа, заболевании дыхательных путей, аутоиммунных недугах, раке, склерозе.

Аллергия способствует выработке антигенов, чужеродных организму пациента. Они распознаются тест-системой с выдачей ложного результата. Грибковая, вирусная инфекции способствуют неправильному определению наличия вируса СПИДа.

Следует пролечить инфекцию, а затем проходить обследование на СПИД. Для получения качественного результата исследования, пациент обязан рассказать врачу о сопутствующих недугах и проводимом лечении.

Диагностика методом ИФА

Общий спектр антител, обнаруженных методом иммуноферментного анализа, появляется у 95% лиц, зараженных вирусом СПИДа. Положительный двойной результат в ИФА предусматривает наличие второго подтверждающего этапа — теста иммуноблота.

Он состоит из исследования антител и их соотношения к индивидуальным белковым структурам возбудителя. Исследование ИФА имеет две реакции: ферментативную и иммунологическую. В основе анализа находится взаимодействие антител и антигенов.

Последовательно определяют антитела, иммунный комплекс, активность фермента. Специалист проводит расшифровку данных анализа. Отрицательные показатели указывают на отсутствие ВИЧ-инфекции у больного.

При небрежном хранении образцов материала для изучения вируса полученные показатели могут быть ложными.

Тест, проведенный после вакцинации пациента, дает положительный результат и не может быть достоверным.

Следует правильно готовить разведение сывороток, чистку использованных планшетов, приобретать краситель высокого качества.

Положительный результат иммуноболтинга проявляется при сочетании полос ГП 41 и ГП 120 и антигена. На отрицательный результат указывает отсутствие полос.

При формировании диагностического заключения учитывают результаты тестов, показатели обследования больного в стационаре, эпидемиологический опрос пациента.

Источник: https://krovetvorenie.ru/vich/diagnostika-vich-infekcii.html

Методы диагностики ВИЧ инфекции

Диагностика ВИЧ инфекции необходима для назначения эффективного лечения. Чтобы диагностировать СПИД, проводится стандартная процедура обследования пациента. Она состоит из 2 этапов:

• сдача скрининга;
• иммунный блоттинг.

Для постановки диагноза дополнительно назначают ПЦР, экспресс-тестирование.

Начальная диагностика СПИДа основана на применении лабораторных белков ВИЧ, которые улавливают специфические антитела. После их контакта с ферментами тест-системы изменяется цвет индикатора. Затем измененная цветовая гамма обрабатывается с помощью специальной аппаратуры, которая определяет результат тестирования.

Подобная лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции показывает результат через 21 день после инфицирования. С помощью ИФА нельзя определить наличие вируса. Данный метод диагностики способствует выявлению выработки антител к вирусу. Подобный процесс может наблюдаться через 2-6 недель после заражения.

Специалисты различают 4 поколения ИФА-систем с разной чувствительностью. Медики чаще применяют тесты 3 и 4 поколения. Эти системы созданы на основе рекомбинантных белков либо пептидов синтетического происхождения, которые обладают значительной точностью и специфичностью.

За 8 часов перед исследованием рекомендуется отказаться от принятия пищи. Исследование чаще проводится утром.

Расшифровка данных

Для получения результатов теста потребуется 10 дней. Если результат отрицательный, то пациент не инфицирован. В таком случае лечение не назначается. Ложноотрицательный результат выявляется:

• до 3 недель после инфицирования;
• на последней стадии СПИДа при низкой иммунной системе;
• при неправильной подготовке крови.

Если результат положительный, тогда пациент инфицирован. В таком случае проводят ИБ. Ложноположительный результат указывает на наличие сопутствующих заболеваний и неправильно проведенную подготовку крови.

Если тестирование показано беременным, то в собранном материале врач может выявить неспецифические антитела, выработка которых не связана с вирусом. Собранный материал исследуется в референсе либо арбитражной лаборатории.

Если результат повторного тестирования отрицательный, тогда первый результат — ошибочный. В таком случае ИБ не проводится.

Проведение иммунного блоттинга

Лечение СПИДа назначается при получении положительного результата иммунного блоттинга. Этот метод диагностики проводится с помощью нитроцеллюлозной полоски, на которую наносятся вирусные белки.

Для ИБ используют венозную кровь, которая затем подвергается обработке. Белки, находящиеся в сыворотке, разделяются на группы с учетом их заряда и молекулярной массы.

Для проведения такого процесса используется специальная аппаратура.

При наличии в исследуемом материале антител к вирусу, на полоске проявляются соответствующие линии. Положительное ИБ указывает на ВИЧ-инфицирование пациента. Сомнительный результат выявляется на начальных этапах заражения, при туберкулезе и онкологии, у беременных. В таких случаях рекомендуется повторное проведение ИБ.

Неопределенный результат ИБ указывает на наличие в иммуноблоте одного и более белков к вирусу. Подобная картина наблюдается при недавнем заражении, когда в крови находится незначительное количество антител к инфекции.

В таком случае ИБ будет положительным через некоторое время. Неопределенный результат данного исследования может быть связан с отсутствием ВИЧ-инфекции при гепатитах, хронических обменных заболеваниях, в период беременности.

В таком случае ИБ станет отрицательным или специалисты выявят у пациента причину неопределенного результата.

Защитная система поражается на фоне внедрения вируса в человеческий организм. Для инкубационного периода характерен срок в 3 месяца. Поэтому после полового контакта с ВИЧ-инфицированным партнером рекомендуется пройти ПЦР-диагностику. Она позволит определить РНК вируса. Период, в течение которого рекомендуется пройти подобное исследование, составляет 8-24 месяца.

Ложноположительный результат при ПЦР можно получить и при наличии в организме пациента другой инфекции.

ПЦР исследование считается дорогостоящей процедурой, так как требует наличия специального оборудования.

ПЦР назначается для выявления вируса у следующих лиц:

• новорожденный, родившийся от ВИЧ-инфицированного матери;
• пациенты с сомнительным ИБ.

Также данная методика показана для контроля концентрации вируса в крови и исследования донорской крови.

Быстрые методики исследования

К современным методам диагностики СПИДа специалисты относят экспресс-тесты. Для их расшифровки потребуется 10-15 мин. Иммунохроматографические тесты, основанные на капиллярном потоке, обеспечивают точные результаты. Такие системы тестирования представлены в виде специальных полосок, на которые наносится кровь либо слюна. При наличии вируса через 10 мин на тесте появляются 2 полоски:

В данном случае результат тестирования носит положительный характер. На отрицательный результат указывает появление одной контрольной полоски. Для подтверждения полученного результата проводится ИБ. На основе общий данных врач ставит диагноз, назначает лечение.

Можно выявить вирус в домашних условиях. Для этого используют специальные экспресс-наборы. OraSure Technologies1 — система, разработанная в США. Если после тестирования выявлен положительный результат, пациенту рекомендуется пройти полное обследование в медицинском центре.

Новорожденные детки, которые родились от инфицированных матерей, срочно подвергаются обследованию. С помощью серологических методик нельзя точно выявить вирус у деток в возрасте 5-18 месяцев. Но результат такого обследования важен при проведении ИБ.

Выявить инфицирование у деток можно с помощью ПЦР. ДНК вируса выявляет специалист у детей первого месяца жизни. Чтобы установить концентрацию РНК возбудителя, специалисты определяют провирус иммунодефицита.

Для исследования врач использует цельную кровь либо ее высохшее пятно. Материал помещается в пробирку с консервантом ЭДТА (пропорция 1:20). Образец необходимо хранить при температуре не выше 8°С (на протяжении 2 суток).

Не допускается замораживание материала.

Для получения образца сухой крови наносят цельную жидкость на специальную бумагу. Образец можно хранить при температуре ниже 8°С. Карточки используют в течение 8 месяцев. Новорожденного ребенка необходимо осмотреть, взяв материал на исследование, в течение следующих сроков:

• через 48 часов после рождения;
• в возрасте 2 месяцев после рождения;
• через 3-6 месяцев после рождения.

Если врач выявил ген провируса ВИЧ через несколько часов после появления младенца на свет, то произошло внутриутробное инфицирование малыша. Заразиться вирусом можно и во время родов либо при грудном вскармливании.

Результаты, которые указывают на наличие ДНК вируса в 2 образцах, указывают на развитие СПИДа у ребенка. Диспансерное наблюдение не требуется, если результаты ПЦР отрицательные через 4 месяца после рождения малыша.

Если результат тестирования отрицательный, но симптоматика СПИДа присутствует, тогда рекомендуется проконсультироваться с врачом. Подобная клиника может быть спровоцирована другими заболеваниями. Единственным и 100%-ным методом диагностики вируса считается тестирование. Даже квалифицированные и опытные специалисты не могут определить вирус по проявляемой симптоматике.

При этом не учитывается симптоматика. Но подобная клиническая картина может быть связана со СПИДофобией. В таком случае требуется помощь психолога. При необходимости ребенку или взрослому назначают соответствующее лечение.

Источник: https://nozppp.ru/vich/diagnostika-vich-infekcii.html

Лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции: современные возможности

Вирус иммунодефицита человека (ВИЧ) является этиологическим фактором развития синдрома приобретенного иммунодефицита (СПИД) человека.

ВИЧ персистирует в лимфоцитах, макрофагах и клетках нервной системы человека, приводя к прогрессирующему повреждению иммунной и нервной систем. Клинически это провляется вторичными инфекциями, опухолями, подострым энцефалитом, миелопатиями и невритами.

В настоящее время описаны ВИЧ двух серотипов (ВИЧ-1 и ВИЧ-2). В мире наиболее широко распространен ВИЧ-1, включающий 4 группы: М, N, O и P. Эпидемиологическое значение имеет группа М (major), которая делится на 9 подтипов.

Группы N, O и P распространены в Западной и Центральной Африке. Пути передачи двух типов вируса одинаковые, однако, ВИЧ-2 имеет более низкую скорость размножения и, соответственно, более медленное развитие болезни.

Эпидемическая ситуация в Украине

Эпидемическая ситуация по ВИЧ-инфекции в Украине в настоящий момент имеет тенденцию к ухудшению за счет повышения удельного веса полового пути передачи. Прогноз дальнейшего распространения инфекции усложняется из-за экономического кризиса и наличия зоны вооруженного конфликта в стране. С 1987 по 2015 гг.

по данным лабораторных исследований в Украине получено 479 358 ВИЧ-положительных результатов, официально зарегистрировано 280 358 случаев ВИЧ-инфекции среди граждан Украины и 8 457 случаев смерти от заболеваний, обусловленных СПИДом (1).

По оценке экспертов, ВИЧ-инфекция в Украине имеет признаки третьей стадии эпидемического процесса – генерализованной эпидемии (2). Точная лабораторная диагностика является необходимым условием определения ВИЧ-статуса пациента.

Диагностика важна для своевременного начала высокоактивной антиретровирусной терапии, позволяющей не только предотвратить разрушение иммунной системы, но и вернуть ВИЧ-инфицированного пациента с четвертой клинической стадии заболевания на более легкую, вплоть до первой.

Особенности лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции

История лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции берет начало в 80-х годах ХХ столетия. В настоящее время, прежде всего, используются иммунологические, молекулярно-биологические и гематологические методы.

Молекулярно-биологические (полимеразная цепная реакция, ПЦР) методы имеют высокую стоимость и для первичного скрининга не используются.

Серологические методы основаны на определении антител к вирусу, обладают высокой чувствительностью и специфичностью и являются преимущественными в выявлении ВИЧ-инфекции. 

Тест-системы ІІІ поколения позволяют определять Ig G и Ig M с более коротким, чем у первых двух поколений, периодом «серологического окна» (от 20 дней с момента заражения).  

Наиболее современными являются тест-системы ІV поколения (комбинированные). Они предназначены для одновременного выявления антител к ВИЧ-1 и ВИЧ-2 и антигена р24 ВИЧ-1, что позволяет сократить период «серологического окна» на 2-3 недели. 

Динамика виремии после заражения подробно изучена для ВИЧ-1. Последовательность возникновения лабораторных маркеров выглядит следующим образом:

• Латентный период — первые 10 дней после инфицирования маркеры не определяются. 
• Период «серологического окна» — это интервал между заражением и появлением антител. На его продолжительность влияют тип диагностической тест-системы и ее чувствительность. Для этого периода характерно повышение уровня сердцевинного антигена р24, являющегося основным белком, формирующим нуклеокапсид ВИЧ-1. Тест-системы IV поколения сокращают этот период и способствуют более раннему выявлению факта инфицирования.
• Острая ВИЧ-инфекция – период между появлением РНК ВИЧ в плазме до появления первых антител IgM, циркулирующими в течение виремии. Продолжительность периода также зависит от характера и чувствительности тест-систем.
• Закрепленная (установившаяся) ВИЧ-инфекция (через 3-12 недель после заражения) – иммунный ответ в виде IgG достаточно выражен для получения положительного ответа с использованием ИФА или Вестерн-блот методик.

Через 4 недели после заражения ВИЧ-специфические антитела определяются в 60-65 % случаев, через 6 недель — в 80 % случаев, через 8 недель — в 90 % случаев, через 12 недель — в 95 % случаев. В стадии СПИДа количество АТ может снижаться вплоть до полного исчезновения.

Исследования показали, что риск передачи ВИЧ-1 от человека на ранней стадии гораздо выше, чем в период установившейся ВИЧ-инфекции в связи с максимально высоким количеством вируса в плазме крови, цервикальном секрете у женщин и семенной жидкости у мужчин (3, 4). Данный факт повышает значимость ранней (до формирования устойчивых уровней антител) диагностики ВИЧ-инфекции. 

Преимущества лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции в МЛ ДІЛА

В МЛ ДІЛА для диагностики ВИЧ предлагается Скрининг ВИЧ 1/1о/2 (антиген и антитела), где используются современные тест-системы IV поколения производства Siemens, рекомендованные FDA для диагностики ВИЧ-инфекции как у детей, так и у взрослых, включая беременных женщин (5). Тест-система содержит рекомбинантные антигены, включающие белки внешней оболочки gp 41/120 ВИЧ-1 и gp 36 ВИЧ-2. Добавлен синтетический белок для определения антител к ВИЧ-1 группы О, а также белки к подгруппам A, B, C, D, E, F, G, H, J, AE и AG, входящим в эпидемиологически значимую группу М. Также в данной тест-системе используются моноклональные антитела, специфические к антигену р24, для его определения в образце биоматериала. Специфичность теста составляет 99,74%, чувствительность — 100% как к ВИЧ-1, так и к ВИЧ-2. 

Тестирование и верификация результатов скрининга ВИЧ проводится согласно Приказу МОЗ №1141 от 21.12.2010 г.

и в соответствии с принятой в Украине стратегией лабораторной диагностики при сомнительном или положительном результате первого теста: иммуноферментный анализ (ИФА) + альтернативный ИФА или ИФА + иммуноблот (ИБ).

Порядок верификации определяется в зависимости от анамнестических данных, социально-поведенческой характеристики обследуемого и других данных (2).

Отрицательный результат означает, что человек не инфицирован либо находится на стадии «серологического окна» и, при наличии факторов риска инфицирования, нуждается в повторном тестировании через 3 и 6 месяцев.

На терминальной стадии СПИДа образование антител может быть нарушено, что приводит к ложноотрицательному результату тестирования. Положительный результат после верификации означает, что человек с высокой степенью вероятности ВИЧ-инфицирован. Ложноположительный результат могут давать антитела к вирусу Эпштейна-Барр, ревматоидному фактору, главному комплексу гистосовместимости HLA. Положительный результат скрининга у детей до 18 месяцев, рожденных от ВИЧ-инфицированных матерей, может быть неинформативным, диагностика у таких детей должна проводиться с применением метода ПЦР. 

Кроме диагностики ВИЧ-инфекции лабораторные исследования применяются с целью диагностики оппортунистических и сочетанных инфекций, а также мониторинга антиретровирусной терапии.

Туберкулез, вирусные гепатиты В и С (ВГВ, ВГС), инфекции, передающиеся половым путем (ИППП) являются наиболее часто встречающейся сочетанной инфекцией у ВИЧ-инфицированных людей.

Для диагностики ВГВ и ВГС МЛ ДІЛА предлагает как комплексные программы:

программу 162 «Проверься на гепатит В», 

программу 163 «Проверься на гепатит С», 

так и отдельные исследования: 

«Антитела к вирусу гепатита С – скрининг (Anti-HCV)», 

«Антитела общие к HBcorAg гепатита В», 

«HBsAg вируса гепатита В».

Программы 105 «Диагностика урогенитальных заболеваний у мужчин» и 130 «Диагностика урогенитальных инфекций у женщин» созданы с целью комплексной первичной лабораторной диагностики ИППП. 

При оппортунистических инфекциях бактериологические посевы с антибиотикограммой необходимы для выявления этиологического фактора и выбора антибактериального препарата для лечения. 

Гематологическая и биохимическая панели включают исследования, необходимые для оценки функций органов и систем и оценки состояния пациента.

Объединенная программа Организации Объединенных Наций по ВИЧ/СПИДу (ЮНЭЙДС) внедряет глобальную стратегию «90-90-90», согласно которой до 2020 года необходимо достичь следующих показателей: 90%, живущих с ВИЧ, будут знать о своем диагнозе, 90% из них будут получать антиретровирусную терапию, которая в 90% приведет к снижению уровня вирусной нагрузки до неопределимого. Первым этапом реализации данной стратегии служит широкое проведение тестирования, что является базисом для улучшения как качества, так и продолжительности жизни ВИЧ-инфицированных людей. 

Литература

1. «ВИЧ-инфекция в Украине» Информационный бюллетень Государственного учреждения «Украинский центр контроля за социально опасными болезнями МОЗ Украины». Киев, 2016.

2. Базові питання добровільного консультування і тестування на ВІЛ-інфекцію: Навчальний посібник для лікарів/ за ред.. Дзюблик І.В. – К., 2007.-171 с.

4. Pilcher CD, Joaki G, Hoffman IF, et al. Amplified transmission of HIV-1: comparison of HIV-1 concentrations in semen and blood during acute and chronic infection. AIDS. 2007;21(13):1723-30. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17690570.

5. Complete List of Donor Screening Assays for Infectious Agents and HIV Diagnostic Assays. http://www.fda.gov/

Источник: https://dila.ua/rus/innovation/print/laboratornaja-diahnoctika-vich-infektsii-covremennye-vozmozhnocti.html

Способы диагностики ВИЧ-инфекции

: 06 июн 2016, 17:33

Диагностика ВИЧ производится несколькими разными методами. Казалось бы, ничего проще, чем выявить это заболевание посредством забора крови, нет. Но это не совсем так.

Диагноз ВИЧ действительно можно выявить таким образом, но дальнейшее исследование производится разными методами. От них во многом зависит, какое лечение будет прописано пациенту, и какие меры будут приняты впоследствии.

  Среди самых распространенных и высокоэффективных методов принято выделять скрининговый анализ и иммунный блоттинг. Каждый из них следует рассмотреть более подробно.

СПИД диагностика: скрининговый анализ

Скрининговый анализ или метод исследования ИФА применяется на начальном этапе диагностики ВИЧ-инфекции. При разработке этого способа в лабораторных условиях искусственно создавались белки вируса. Они особым образом реагируют на антитела.

Последние вырабатываются в организме при появлении в нем клеток, зараженных страшным недугом. Лабораторная диагностика ВИЧ в этом случае производится при помощи искусственных ферментов. Вступая во взаимодействие с антителами, они окрашиваются в определенный цвет.

Полоска с индикатором после попадания на нее крови, помещается под специальный аппарат, с помощью которого удается определить, имеется ли у человека данное заболевание или нет.  Современные методы диагностики ВИЧ,  в том числе и ИФА позволяют определить  факт заражения или его отсутствия с высокой точностью.

Но, как и вся техника, аппарат для скринингового анализа имеет погрешность. Именно поэтому при необходимости анализ пересдается пациентом.

Важно знать, что ИФА тест – один из самых ранних методов определения наличия в организме вируса иммунодефицита. ВИЧ-инфекция – диагноз, который возможно выявить только через несколько недель после заражения. При попадании инфицированных клеток в кровь, иммунная система организма начинает активно сопротивляться.

Происходит выработка антител, которые обнаруживаются методом лабораторного исследования спустя две или три недели. Ранняя диагностика ВИЧ-инфекции посредством ИФА теста позволяет выявить антитела к вирусу иммунодефицита в крови человека. В этом заключается ее основное отличие от других современных методов.

Стоит отметить, что у некоторых людей антитела к данному заболеванию начинают вырабатываться на более поздних сроках.  С момента заражения до начала данного процесса может пройти от трех до шести недель.

Методы лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции ИФА разрабатывались на протяжении длительного времени. На сегодняшний день существует четыре поколения тестов. Наиболее точными и эффективными из них считаются те, что были разработаны последними.

Лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции и СПИДа при использовании третьего и четвертого поколения ИФА тестов осуществляется при помощи рекомбинантных белков и пептидов. Чувствительность этих тестов к антителам, вырабатываемым организмом, составляет 92 – 93%. Речь идет о российских методах исследования.

Европейцы научились делать подобные тесты с чувствительностью от 99%.

Современные методы лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции на основе ИФА используются не только для того, чтобы выявить наличие заболевания. С помощью скринингового анализа возможно проводить мониторинг распространения вируса иммунодефицита, а также забор тестового материала перед осуществлением взятия крови у доноров.

ИФА — стандартный метод диагностики ВИЧ инфекции: как осуществляется, почему дает ложный результат?

Диагностика ВИЧ и СПИД посредством ИФА – стандартная процедура. Забор крови у пациента производится из вены. Для анализа достаточно пяти миллилитров материала. Клиническая диагностика ВИЧ 2 и 1 типа производится минимум через восемь часов после приема пищи. Врачи рекомендуют проводить ее утром натощак.

Результаты полного исследования бывают известны через два или три дня. Экспресс скрининг производится за меньшее время. Как правило, на это уходит всего несколько часов. Однако погрешность в этом случае увеличивается. Экспресс постановка диагноза ВИЧ необходима в экстренных случаях, например, когда больному нужна срочная операция.

Такой анализ обязательно производится перед внеплановыми хирургическими вмешательствами, ведь при наличии у пациента вируса иммунодефицита, медики соблюдают повышенные меры безопасности.

Клиническая диагностика ВИЧ-инфекции в короткий промежуток времени необходима и в том случае, когда забор донорской крови должен быть произведен быстро для спасения другого пациента.

Бывают случаи, когда человеку поставили диагноз СПИДа или ВИЧ, а в результате он не подтвердился или наоборот. Почему так происходит в случае с ИФА тестом? Ложноотрицательный результат может быть по причине того, что кровь была подготовлена к исследованию ненадлежащим образом.

Иногда причиной этому становится неправильное выполнение ее забора. Ложноотрицательный результат при верификации диагностики ВИЧ-инфекции не подтверждается и в том случае, когда материалы для исследования были взяты слишком рано. Ведь после заражения должно было пройти не менее трех недель.

Существуют случаи, когда результат обнаружения вируса иммунодефицита оказывается ложноположительным. Это связано с общим состоянием иммунной и гормональной систем человеческого организма. В большинстве случаев у пациента наблюдаются заболевания, которые и являются следствием ложноположительного результата.

В этот перечень можно включить пациентов на диализе и лиц, которые незадолго до дифференциальной диагностики ВИЧ проходили вакцинацию.

Говоря о скрининговом анализе, важно отметить, что этот метод исследования требует подтверждения. Врачи, перед тем, как ставят диагноз ВИЧ на его основании, обязательно отправляют больного на иммунный блоттинг.

Основные методы лабораторной диагностики ВИЧ инфекции: иммунный блоттинг

СПИД,  диагностика и лечение которого тесно взаимосвязаны, выявляется сразу несколькими способами. Как уже говорилось выше, одного ИФА теста бывает недостаточно для того, чтобы окончательно определиться с диагнозом.

Дифференциальная диагностика ВИЧ-инфекции в этом случае дополняется иммунным блоттингом. В современной медицине его называют окончательным подтверждающим методом постановки диагноза. Для исследования в этом случае используются белки, содержащиеся в крови пациента.

Они разделяются в специальном геле, после чего у работников лаборатории появляется возможность изучить молекулярный состав крови.

Сроки диагностики ВИЧ при таком методе составляет от одного до трех дней. Для исследования из вены испытуемого берут кровь, которую помещают на тестер с гелем. Результат, который ставится под сомнение, может возникнуть при беременности, наличии онкологических процессов, туберкулезе.

Ложноотрицательная реакция на тест может возникнуть при неправильном проведении исследования и в случае, если оно проводилось слишком рано. С момента заражения должно пройти не менее трех недель. Ведь то, через какое время диагностируется ВИЧ, напрямую зависит от состояния иммунитета.

Другие методы диагностики СПИДа и ВИЧ

Методы лучевой диагностики при СПИДе используются, как правило, в терминальной или вторичной  стадиях. С их помощью удается установить изменения, которые происходят в организме из-за вторичных заболеваний или оппортунистических инфекций.

Биорезонансная диагностика ВИЧ, которую также называют нелинейным сканированием, для выявления вируса иммунодефицита используется в основном в частных клиниках. Официальная медицина считает такой метод недостаточно точным и эффективным. Возможно, усовершенствование нелинейной диагностики в будущем позволит выявлять этот страшный диагноз уже в инкубационном периоде.

Диагностика ВИЧ-инфекции: серологический метод и его особенности

Это сравнительно новая методика, при которой лабораторные критерии диагностики ВИЧ-инфекции основываются на принципе антиген-антитело. В случае с вирусом иммунодефицита происходит поиск антител к вирусу в организме человека.

Для этого используется искусственным образом выведенный антиген, на который должны отреагировать антитела. Специфические серологические маркеры ВИЧ-инфекции вызывают специфические изменения в составе крови. Стоит отметить, что данный метод исследования наиболее эффективен в острой стадии, которая заканчивается сероконверсией.

За ней следует бессимптомный латентный период, во время которого найти антиген бывает не просто.

Референс-диагностика ВИЧ-инфекции: описание и особенности

ВИЧ-референсные значения считаются наиболее точными в выявлении диагноза. Данный метод исследования объединяет ИФА тест и иммунный блоттинг. Референс-лаборатория диагностики ВИЧ позволяет осуществить забор анализов и последующую их обработку сразу двумя способами.

Это позволяет в течение суток получить максимально точный результат. Перепроверка анализа, полученного в референс-лаборатории необходима лишь в том случае, если данные ИФА теста и иммунного блоттинга противоречат друг другу.

Это достаточно редкое явление, которое чаще всего бывает  у людей с вышеописанными сопутствующими заболеваниями. 

загрузка…

загрузка…

загрузка…

Интересные материалы по этой теме!

загрузка…

загрузка…

загрузка…

загрузка…

Виталий —  02 июл 2018, 17:30

Значит мне необходимо делать тест на ВИЧ ИФА. Мне сказали сразу ПЦР делать и не задумываться.

Максим —  25 апр 2018, 16:33

Да, можно. Анализ делают в районной поликлинике.

Влад —  06 фев 2018, 12:48

Можно ли скрининговый анализ сделать бесплатно? Где лучше всего его делать?

Николай —  16 авг 2017, 15:27

Сколько нужно сдавать кровь, чтоб был точный результат?

Валерия —  10 фев 2017, 12:00

Иммунный блотинг может достоверно показать наличие ВИЧ-инфекции.

Источник: http://www.zppp.saharniy-diabet.com/vich-spid-1/diagnostika-2

Поделиться: